推荐用于光谱成像应用的显微镜系统

光谱成像

拆分荧光信号

通过合理地选择荧光标记、选择滤色片和多通道荧光成像策略,大多数荧光成像得到令人满意结果。但实验参数的选择往往受到限制。对于多种标记活细胞研究,使用可以明显区分光谱的荧光探针并非总是可行的。此外,自发荧光会引起假阳性图像。使用固定剂或 DNA 转染试剂都会增加自发荧光,从而掩盖真实的荧光信号。为避免这类问题的出现,使用光谱成像与线性解析技术分离荧光信号,即使荧光基团的发射峰距离很近。这种光谱成像技术常被称作发射光指纹识别技术。

光谱成像 - 光谱学与荧光成像融合

光谱成像融合了光谱学和影像学两种业已成熟的技术。使用光谱成像可获得λ堆栈,这种堆栈被视为是一个图像集,每个图像都经过窄频波段内的测量。尽管价格昂贵,但蔡司LSM800激光共聚焦显微镜能够通过VDS分光镜连续采集λ堆栈。有了LSM 800LSM 880显微镜,您甚至能够利用线性排列的探测频道采集到并联多发射频带光谱图。新型QUASAR探测器可同时识别出多达34个通道。因此,您只需通过一次扫描即可获得完整的λ堆栈,更大限度地减少了光毒性。此外,卓越的噪声抑制设备使您在无干扰的环境下执行先进处理技术。每个频道内的信息都可保存下来以待深入分析。

线性解拆分 - 分离光谱指纹图谱:

线性解拆分技术能将从生物样本中采集的全部光谱信息根据每个荧光基团的特性分离成单幅图像。通过算法实现线性解拆分,对比 lambda 序列图像中每个像素的光谱信息与样品标记的荧光基团光谱信息。ZEN 软件专门开发了用于结果处理、解释和显示的软件功能块。
使用光谱成像和线性解析分技术,来解决光谱核型分析、免疫荧光、活细胞成像、药物研发和组织病理学领域中的诸多问题检测和区分大量荧光染料和荧光基团,即便他们光谱严重重叠。这尤其适用于在 FRET 实验中量化复杂的荧光信号。将自发荧光作为单独的荧光基团从感兴趣的信号中分离。

教程初始化时,在光谱窗口中显示 EGFP(红色曲线)和 Alexa Fluor 488(绿色曲线)以 1:1 混合比例叠加的光谱。每种探针的荧光强度与总荧光强度的关系(Ii(?))会以一个波长函数(I(?))的形式显示在图片下方。操作时,使用滑块在 0 至 100% 之间调整荧光基团 A 和荧光基团 B 对总强度的影响。下拉菜单可用于选择同一颜色区域内的不同荧光基团。从最下方的下拉菜单中选择第三种荧光基团(荧光基团 C),以检测拥有三种成份的光谱。三种成份模型中的某一荧光基团对总强度的影响可通过点击位于滚动条左侧的扣锁图标进行锁定。一旦锁住某个荧光基团,则只能更改其余两种荧光基团对总强度的影响。

欲知更多详细信息,请登录蔡司在线校园(ZEISS Online Campus)

教程:发射光谱的叠加特性
折叠

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