蔡司冷冻关联工作流程

在酵母细胞内定位纺锤极体这种又小又罕见的结构十分困难。而蔡司冷冻关联工作流程可以让您在接近原生状态的情况下对这种细胞结构进行准确的识别和成像。配备Airyscan探测器的LSM使得这些结构更容易辨识，因此可以对更多细节进行成像。所有图像（从整个细胞的大范围概览到这些微小结构的高分辨率图像）都可整理在一个ZEN Connect项目中，为后续在FIB-SEM中重新定位这些细胞结构提供所需的所有数据。

使用Crossbeam可以为Cryo-ET制备已识别区域的TEM薄片，也可进行体积成像。此外，蔡司冷冻关联工作流程解决方案可让您在图像采集后重新连接所有数据。Crossbeam的图像或TEM的断层扫描成像可与LSM数据相结合，并进行三维渲染。

_{NUP（核孔复合物）-GFP和CNM67-tdTomato标记的酵母细胞。
样品和断层扫描图像由瑞士苏黎世联邦理工学院的M. Pilhofer提供}

癌细胞呈现强烈的线粒体裂变表型，这可能是其产生抗药性的原因。化学固定方法经常会造成线粒体堆积等伪影，而这些伪影可能被误认为裂变事件。冷冻固定则可以避免这些伪影，并将样品保持在接近原生状态。

示例显示了蓝宝石盘上快速冷冻的腺癌细胞。LSM数据突出显示了一个裂变增加的密集型线粒体网络，该裂变随后由Crossbeam数据证实。LSM和Airyscan成像后，玻璃化样品被转移到Crossbeam中。ZEN Connect用于重新定位感兴趣区域，在采集后叠加各自的数据集，并管理所有采集到的图像。

整个秀丽隐杆线虫由HPF固定，处于中期的胚胎细胞通过低温荧光显微镜进行原位成像。然后通过冷冻替代对筛选出的线虫进行重金属染色、树脂包埋和切片，因此可以使用Crossbeam对相同的三维结构进行高分辨率、高衬度的定位和成像。使用这一工作流程可以成功重构线虫处于中期的胚胎细胞。此外，该方法可给您带来意外收获：一个相邻的有趣的点状荧光信号能够与一个假定的自噬体相关联。

因此，低温荧光显微镜能够对高压冷冻厚样品接近原生状态的瞬时细胞结构进行捕捉和成像；通过合适的处理并关联三维结构电镜成像，可以对这些目标结构进行高分辨率的三维重构。

_{由美国国家癌症研究所/ NIH和弗雷德里克国家癌症研究实验室的K. Narayan提供}