高效液相色谱法

高效液相色谱法

HPLC 是一种用于分离混合物中不同成分的方法,以便能够辨识和量化各成分。它可以分离复杂生物样品或彼此类似合成化学品的成分。HPLC 仪器通常包含一个采样器、多个泵及一个探测器。

测量理论

常用方法包括水与各种有机溶剂的组合——常见的是乙腈和甲醇。某些 HPLC 技术也可以在检测中不使用水。

泵让加压后的有机溶剂流经充填有固体吸附材料的分析管柱(粒状材料由固体颗粒组成,如 2-50 微米大小 的二氧化硅或聚合物)。样品中的每种成分会以略有不同的方式与吸附材料相互作用,从而产生不同流速。当流出分析管柱时,通过这些不同的流速来区分成分。成分和温度在分离过程中起着重要作用。探测器会分析分析管柱中出现样品的成分量。常用探测器为 UV-Vis 光电二极管阵列(PDA)或基于质谱技术。数字微处理器和用户软件控制 HPLC 仪器,并为后续分析提供数据。

非常高的工作压力(50-350 bar)使 HPLC 有别于传统低压液相色谱法。在分析 HPLC 中分离的样品数量非常小:典型的分析管柱尺寸为 2.1-4.6 mm(直径)和  30-250 mm(长度)。分析管柱也可使用较小的吸附剂颗粒制成(平均颗粒度为 2-50 微米)在分离混合物时,它们让这些现代化技术拥有出众的分辨性能。

使用示例
  • 检测血清中的维生素 D 或尿中的性能增强药物
  • 在药品和生物产品的生产过程中测量成分
  • 分析农业和食品制造中的加工物质