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采用水银灯扫描进行紫外线激励等例子
Endothelial cells
click on image to see larger version		内皮细胞，三重FL
(细胞核- DAPI, 线粒体 - 线粒跟踪器 红, F-肌动蛋白- BODIPY)
物镜 PlanApochromat 63x/1.4 Oil
扫描速度8 (325 Hz line frequency)
平均模式8x 线
针孔尺寸1 Airy (1.5 Airy 适合DAPI 通道)
图象分辨率512 x 512 x 3 ch x 12 Bit
照明HBO 103, VIS 激光(488, 543 nm)
探测多道跟踪模式
Mouse intestine section
click on image to see larger version		老鼠肠切面, 三重FL
(细胞核用Alexa 350染色)
物镜PlanNeoFluar 20x/0.5
扫描速度9 (520 Hz 线频率)
平均模式 16x line
针孔尺寸1 Airy (1.5 Airy for UV channel)
图象分辨率512 x 512 x 3 ch x 8 Bit
照明HBO 103, VIS 激光 (488, 543 nm)
探测多道跟踪模式

总体评价：
采用HBO紫外线激励是一种在细胞和组织内部确定用DAPI染色的细胞核位置的可行方法。但是采用紫外线激光（在LSM510中有）的明显优势在于：共焦、操作、漂白和照相毒性的衰减和数减少

系统安装 :
三重荧光图象按标准记录
采用标准DC控制的HBO103水银灯（稳定性+/-1%）的Axiovert 200 M上的LSM 5 PASCAL，用于兰色通道；激光线488 nm和543nm用于绿色和红色通道。与标准FL照明接口连接的HBO 103。

获取DAPI通道是半共焦（亮场照明和点扫描探测）。
DAPI图象的三维扫描是可行的。

LSM多通道跟踪的特点被用来防止散发串话。
2号图象：所有3个单独通道轮流扫描并自动被拷贝到多颜色图象中。
1号图象：在多通道跟踪模式下进行扫描的红/绿色通道首先避免HBO漂白，然后进行单独的DAPI通道扫描。采用拷贝功能以数码形式合并通道。

DAPI通道安装:
DAPI滤光镜组被插入在LSM位置（通常是自由的）的显微镜的荧光滤光镜旋转体中。
用作DAPI通道（散发滤光镜、设定到‘无’位置的LSM的一级和次级光束分离器）的PMT通道1。
DAPI滤光镜组用来反射紫外线激励并传送DAPI散发（滤光镜的长久通过特点允许VIS激光激励和探测标准LSM方法，但传送速度较低）

采用LSM的其他方法:

反射比共焦显微：
RCM_RGB1_small
点击图片可看到放大图片		放置在Spurr-树脂内的用甲苯胺蓝做染色的大鼠结肠超薄切片
物镜 PlanApochromat 63x/1.4 Oil
扫描速度7 (260 Hz 线频率)
象素时间1.12 祍
平均模式4x 线
针孔尺寸< 1 Airy
图象分辨率1024 x 1024 x 3ch x 8 Bit
照明红、绿、蓝激光
探测内部PMTs, 多通道跟踪

用LSM作RBG相机(1)
Trans_Laser_RGB_small
点击图片可看到放大图片		小老鼠切片，组织染色
物镜PlanNeoFluar 10x/0.3
扫描速度8 (325 Hz 线频率)
象素时间0.4 祍
平均模式 无
针孔尺寸<1 Airy
图象分辨率2048x2048 x 3ch x 12 Bit
照明红、绿、蓝激光
探测传送PMT, 多通道跟踪

用LSM作RGB相机（2）
Trans_HAL_RGB_small
点击图片可看到放大图片		小老鼠切片，组织染色
物镜PlanNeoFluar 10x/0.3
扫描速度 8 (325 Hz 线频率)
象素时间0.88 祍
平均模式 16x 线
针孔尺寸1 Airy
图象分辨率1024 x 1024 x 3ch x 8 Bit
照明卤素灯 (微妙的)
探测内部PMT, 多通道跟踪

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还可以访问：
http://www.zeiss.de/LSM
http://www.zeiss.de/PASCAL


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